■产品简介
MaV203 菌株是利用酵母体内重组酶构建质粒的菌株,MATa型,可直接转化线性化质粒和基因片段;可以用于筛选标记为TRP,LEU,HIS,ADE的酵母质粒的转化。MaV203 感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,pGADT7质粒检测转化效率>106 cfu/μg DNA。
基因型:MATα, leu2-3,112; trp1-901; his3∆200; ade2-101; cyh2R; can1R; gal4∆; gal80∆; GAL1::lacZ; HIS3UASGAL1:: HIS3 LYS2; SPAL10 UASGAL1::URA3
■注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4. MaV203酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
5. 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48 h培养可见直径1 mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80 h培养可见直径1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1 mm克隆。