■ 使用方法(推荐)
试剂准备:3M NaAc ph5.2,异丙醇和75%乙醇
设 备:小型常温离心机
1、700μL浓缩前的质粒液体,添加1/10体积,即70μL 3M NaAc;
2、加入700μL异丙醇,颠倒混合,可稍微用力混匀。-20℃ 放置15min,提高沉淀效果。12000转离心3min,保留沉淀,缓慢倒掉上清;此操作必须缓慢进行,避免沉淀被倒掉;
注:质粒浓度在100ng/μL以上时,通常在该步骤能看到明显的白色块状或者丝状沉淀。
3、加入700μL 75%乙醇进行漂洗;可稍微用力振荡10s,12000转离心3min,保留沉淀,缓慢倒掉上清;此操作必须缓慢进行,避免沉淀被倒掉;
4、重复第三步一次;
5、5000转离心10s 收集沉淀和漂洗液,使用10μL枪从离心沉淀的另一侧插入底部吸出残留的漂洗液;
6、开盖放置1min,加入适量ddH2O或者其他洗脱缓冲液溶解沉淀,通常回收效率可达80%以上;例如浓缩前100ng/μL希望浓缩到1ug/μL,则加洗脱液50-70μL即可,即浓缩前体积1/10。
注:沉淀通常比较难溶解,可每过3-5min用力弹管底部促进快速溶解;重复1-2次,室温放置30min促进完全溶解后,再次弹管底充分促溶。-20℃保存,或者稀释5-10倍检测浓度和纯度。