■ 产品简介
1.W5溶液是一种原生质体分离实验专用的高钙缓冲液，广泛用于植物原生质体的分离、洗涤、短期保存及PEG介导转化等实验流程。溶液中125 mM的钙离子有助于稳定原生质体细胞膜、降低破碎率；与酶解液等体积混合后可快速稀释酶液、终止酶解反应，是叶肉原生质体等体系中承接酶解与后续操作的关键缓冲体系。
主要应用：
1. 酶解结束后稀释酶液、终止酶解反应；
2. 原生质体的离心洗涤与重悬；
3. PEG介导转化前后原生质体的洗涤与处理；
4. 原生质体的短期保存（冰浴，数小时内）。
■ 产品组成
组分 | 终浓度 | 配制1 L用量 | 备注 |
NaCl | 154 mM | 9.0 g | 氯化钠 |
CaCl2·2H2O | 125 mM | 18.4 g | 二水氯化钙 |
KCl | 5 mM | 0.37 g | 氯化钾 |
MES | 2 mM | 0.4 g | 用KOH调节pH至5.7 |
超纯水 | — | 定容至1 L | 电阻率≥18.2 MΩ·cm |
■ 储存条件与有效期
储存：15-25℃避光、密封保存，防止污染。无菌密封状态下保存1年以上，开封后建议1个月内使用完毕。
使用前检查：溶液应澄清、无沉淀、无浑浊；出现明显浑浊或沉淀且加热无法复溶时，应弃用。
■ 使用方法
W5溶液在原生质体分离与转化中的典型用法如下，具体参数请依据所用实验体系优化。
1. 终止酶解：酶解结束后，向酶解液中加入等体积预冷的W5溶液，轻柔混匀，稀释酶液并终止酶解；
2. 过滤：经40~70 μm尼龙滤网过滤，收集含原生质体的滤液；
3. 离心洗涤：滤液于100×g、4°C离心2~3 min，弃上清；沉淀用预冷W5溶液重悬，同法洗涤1~2次，以去除残余酶液与细胞碎片；
4. 后续处理：洗涤后的原生质体可按实验需要重悬于MMg溶液进行PEG介导转化，或用W5溶液重悬用于其他下游实验；
5. 短期保存：原生质体可在冰浴W5溶液中短期保存（数小时）；W5溶液高钙、高渗，不适用于原生质体长时间培养，长时间培养请使用含甘露醇的专用培养体系（如WI溶液）。
■ 注意事项
1. 原生质体操作须轻柔，避免剧烈吹打、振荡或过长时间离心造成破碎；
2. 与原生质体接触的溶液及耗材建议预冷至4°C；
3. 本溶液仅用于体外实验，不可用于临床、人体或食品用途；
4. 高钙溶液与磷酸盐、碳酸盐等溶液混合易产生沉淀，避免混用；
5. 长期保存或敏感实验建议无菌分装，避免反复开启。
■ 常见问题及处理
现象 | 可能原因 | 处理建议 |
出现白色沉淀 | 钙盐浓度高，低温或pH变化导致析出 | 37°C水浴加热并混匀，复溶后过滤使用；无法复溶则弃用 |
原生质体破碎率高 | 操作剧烈、离心过久或溶液未预冷 | 轻柔操作，使用预冷溶液，缩短离心时间 |
pH偏离5.7 | 储存过久或污染 | 重新配制，或校正后过滤使用 |
