■ 产品简介
本公司生产的BL21 (DE3) T1感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率大于 1×107 cfu/μg DNA。
基因型为：fhuA2 [lon] ompTgal (λ DE3) [dcm] ΔhsdS λ DE3 = λ sBamHIo ΔEcoRI-B int::
(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 Δnin5
■ 产品特点:
BL21 (DE3) T1 来源于 BL21 (DE3)菌株，该细菌具有抗 T1 噬菌体感染的特性，缺乏细胞质蛋白酶Lon 和外膜蛋白酶OmpT。功能和 BL21 (DE3)完全一样。该菌株具备λ噬菌体 DE3 基因区，可以表达 T7 RNA 聚合酶，适用于含有T7 启动子的原核表达载体（如pET 等）的高效表达。非 T7 启动子的表达载体（如 pGEX、pMal，pTrc 等载体）也可以在该菌株中表达。对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素、氯霉素敏感。
■ 操作步骤:
以下操作均按无菌条件的标准进行:
■ 转化：取感受态细胞置于冰浴中（解冻1-2分钟），加入目的DNA，轻轻混匀，在冰浴中放置30分钟。
注意：所使用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的1/10。
■ 热激：将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3
分钟，该过程不要摇动离心管。
■ 复苏：向每个离心管中加入500μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃180rpm
摇床振荡培养45-60分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
■ 涂板：根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相
应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体
被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
提示:
· 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。化冻后感受态细胞冰浴条件下，半小时内活性无明显变化，因
此，同时转化多支感受态细胞时尽量半小时内加完目的DNA。
· 感受态细胞应保存在-70℃，请避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。
· 进行转化操作时，请在无菌条件下，根据相应温度要求进行实验。
· 避免用移液枪吹吸，整个过程要轻柔，尽量低温操作。
· 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。
