▋产品简介:
酵母双杂的原理基础:很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域,即 DNA 特异结合域(DNA-binding domain, BD)与转录激活域(Transcriptional activationdomain, AD)。这两个结构域各具功能,互不影响。但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。不同来源激活因子的 BD 区与 AD 结合后则特异地激活被 BD 结合的基因表达。基于这个原理,可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白,并共表达于同一个酵母细胞内。如果两个待测蛋白间能发生相互作用,就会通过待测蛋白的桥梁作用使 AD 与 BD 形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白系统。分子间是否发生了相互作用。
酵母双杂交系统由三个部分组成 ∶(1)与 BD 融合的蛋白表达载体,被表达的蛋白称诱饵蛋白(bait)。(2)与 AD 融合的蛋白表达载体,被其表达的蛋白称靶蛋白(prey)。(3)带有一个或多个报告基因的宿主菌株。常用的报告基因有 HIS3,URA3,LacZ 和 ADE2 等。而菌株则具有相应的缺陷型。双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营养标记基因。这些有利于实验后期杂交质粒的鉴定与分离。根据目前通用的系统中 BD 来源的不同主要分为 GAL4 系统和 LexA 系统,目前常用的是 Y2HGold-GAL4 和 AH109-GAL4 系统。
Y2HGold 菌株是 GAL4 系统酵母双杂实验用菌株,MATa 型,可直接转化质粒或与 MATα 型酵母菌株 Y187 通过 mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为:trp1,leu2,报告基因为: AbAr,HIS3,ADE2,MEL1。Y2HGold-GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:pGBKT7 和 pGADT7 。 质粒 pGBKT7 的筛选标志为 TRP1,用于表达 DNA-BD(来自酵母转录因子 GAL4N 端 1~174 位氨基酸) 与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒 pGADT7 的筛选标志为 LEU,用于表达 AD(GAL4 C 端 768~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。
▋运输及储存条件:
培养基系列保质期2年,鉴定试剂盒、甘油菌保质期1年,感受态保质期3个月;感受态干冰运输,其余产品冰袋运输;各类产品按照标签所示温度进行储存。