产品简介:
Y187 菌株是 GAL4 系统酵母单双杂实验常用菌株,MATa 型,可直接转化质粒或与MATa 型酵母菌株(Y2HGold,AH109 等)通过 mating 操作进行筛库实验。筛选标志为:trpl,leu2 ,报告基因为:lacZ,MEL1。Y187-pHis2 系统酵母单杂需要pHis2 和 pGADT7-Rec2 两种质粒配套使用。质粒 pHis2 的筛选标志为 TRP,用于表达 pBait-His2 construct(1~3 个 bait DNA 序列重复串联后克隆到 pHis2 中);质粒pGADT7-Rec2 的筛选标志为 LEU,用于表达 AD(GAL4 C端 768~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。Y187-pHis2 系统酵母单杂原理:当猎物蛋白(Prey)结合到诱饵序列(Bait DNA)上,GAL4 AD 就会激活下游报告基因 HIS3 的表达,能够在含有 3-AT 的培养基上生长,从而确定 DNA 和蛋白有相互作用。
本方案中检测诱饵酵母菌株的 3-AT 最佳使用浓度和互作验证都采用了稀释点板的方法,与涂板的方法相比,点板法能更直观的体现出 DNA 和蛋白的互作,还能减少培养基和 3-AT的使用量。本方案还对常见的酵母单杂结果进行了分析。